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    蜀科醫用離心機“腎單層細胞培養”案例
    發布時間:2016-05-19        瀏覽次數:193        返回列表
     蜀科醫用離心機系列產品包含高速離心機,低速離心機,大容量離心機,冷凍離心機等,廣泛應用于制藥、臨床醫學、血站血庫、檢驗檢疫、疾控等科研和生產單位。

     下面簡單介紹通過醫用離心機進行“腎單層細胞培養”的一般操作技術。

    1.取腎:用無菌操作取出斷乳前后幼齡動物的腎臟置滅菌平皿中,http://www.sklxj.com剪去留的被膜和脂肪,并縱向切成兩半,剪去腎的被膜和脂肪,并縱向切成兩半,剪去腎盂及髓質部分,用含雙抗(指青、鏈霉素,下同)的漢克氏液洗凈,移置小燒杯中,剪成乳糜狀,再用漢克氏液洗2—3次,至液體澄清無血細胞為止。

    2.消化;加入10倍的0.125%胰酶液進行消化。有熱消化法(在37℃水浴中)和冷消化法(在4℃冰箱中)兩種。消化的時間根據不同的組織細胞和所用胰酶的活性而定,直至聚成絮狀的腎組織又分散開。取出傾去胰酶,用漢克氏液洗滌數次,然后加入少量乳漢液,用吸管進行吹打(即吸入和吹出)10-20次,使組織分散為細胞。將分散的細胞經2—3層消毒紗布過濾,取濾液置于醫用離心機中以1500轉/分離心十分鐘,棄去上清液,加適昆乳漢液混勻,再次通過離心機離心,最后加入乳漢液使細胞懸浮其中,收集于滅菌三角瓶中。

    3.細胞計數和分裝:取已制好的細胞懸浮液,用計數白細胞的方法計數,根據計數結果,用營養液(pH6.8—7.0)稀釋為每毫升含50-60萬細胞,分裝于小扁瓶中(容量約50毫升的扁瓶加懸液約5毫升),也可分裝在鏈霉素小瓶中。

    4.培養:在37℃培養,3—4天即可粘附瓶壁形成單層細胞,以后每過3—4大更換一次維持液。

    5.接毒;將病料剪碎,按1:4加含雙抗的漢克氏液研磨成乳糜狀,經凍融處理使細胞破碎,病毒充分釋放,用離心機,將轉速控制在3000轉/分左右離心15分鐘,將上清液接種到已生長單層細胞的培養瓶中,在37℃溫箱中吸附30-60分鐘,然后加入維持液繼續培養。

    6.收獲病毒:每日或隔日用低倍顯微鏡觀察細胞病變情況,當有50-75%細胞出現病變隊時可收集培養瓶中液體,從放在冰箱(-20℃)中保存,此即繁殖的病毒液。

    注:培養皿及其他使用器具的潔凈、離心機的使用、水的質量、酸堿度、無菌操作等,都是關系到組織培養成敗的重要問題,必須嚴格規定的要求去做。

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